Electronic Theses and Dissertation

Penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi mikroorganisme yang diisolasi dari dari sumber air panas bawah laut di area Pria Laot Sabang Aceh, yaitu strain PLS 47, melalui analisis kekerabatan berdasarkan urutan gen 16S rRNA. Penelitian ini juga bertujuan untuk menentukan kondisi waktu, pH dan sumber nitrogen optimum untuk pertumbuhan dan produksi protease. Amplifikasi gen 16S rRNA PLS dilakukan menggunakan sepasang primer Bact 27F-Uni 1492R. Analisis homologi menunjukkan bahwa PLS 47 memiliki kemiripan 95% dengan Geobacillus thermoctenullatus strain M-17. Analisis pohon filogenetik menunjukkan bahwa PLS 47 berada dalam cabang terpisah dan memiliki kekerabatan terdekat dengan Bacillus clausii strain DF4. Penentuan kondisi optimum produksi protease dari PLS 47 dilakukan pada medium LB dengan menentukan kurva pertumbuhan, serta memvariasikan pH (5, 7 dan 9) dan sumber nitrogen (yeast extract, ammonium sulfat, beef extract dan limbah padat tahu). Aktivitas protease ditentukan berdasarkan kurva standar tirosin menggunakan metode Anson. Hasil penelitian menunjukkan bahwa kondisi optimum untuk produksi protease dari PLS 47 adalah pada waktu fermentasi 24 jam, pH 7, dan menggunakan sumber nitrogen yeast extract 0,25%. Suhu pertumbuhan dilakukan pada 65°C.

Kata kunci: Analisis filogenetik, 16S rRNA, protease, PLS 47.

This study aims to identify a microorganism isolated from submarine hot springs in the Pria Laot Sabang area of Aceh, i.e., strain PLS 47, through phylogenetic analysis based on 16S rRNA gene sequences. The study also seeks to determine the optimal conditions for growth and protease production, including time, pH, and nitrogen source. Amplification of the PLS 16S rRNA gene was conducted using a pair of primer Bact 27F-Uni 1492R. Homology analysis revealed that PLS 47 exhibited 95% similarity to Geobacillus thermoctenullatus strain M-17. Phylogenetic tree analysis indicated that PLS 47 occupied a separate branch and had the closest relationship to Bacillus clausii strain DF4. The determination of optimal conditions for protease production from PLS 47 was performed in LB medium by evaluating a growth curve and varying pH (5, 7, and 9) and nitrogen sources (yeast extract, ammonium sulphate, beef extract, and tofu solid waste). Protease activity was determined based on a tyrosine standard curve using the Anson method. The results showed that the optimal conditions for protease production from PLS 47 were at a fermentation time of 24 hours, pH 7, and utilising 0.25% yeast extract as the nitrogen source. Growth temperature was maintained at 65°C. Keywords: Phylogenetic analysis, 16S rRNA, protease, PLS 47.