Electronic Theses and Dissertation

Protease merupakan enzim hidrolitik yang memiliki peran penting dalam industri bioteknologi. penelitian ini bertujuan untuk memurnikan serta mengkarakterisasi enzim protease yang dihasilkan oleh isolat bakteri termohalofilik pria laot sabang 47 (pls 47). proses pemurnian diawali dengan fraksinasi menggunakan amonium sulfat, dilanjutkan dengan kromatografi penukar ion menggunakan resin deae-sepharose fast flow. pada tahap fraksinasi amonium sulfat, fraksi dengan rentang kejenuhan 40–60% menunjukkan aktivitas spesifik tertinggi, yaitu sebesar 61 u/mg. selanjutnya, pemurnian menggunakan kolom deae-sepharose fast flow menghasilkan fraksi 23 dengan aktivitas spesifik tertinggi, mencapai 492 u/mg. fraksi 23 yang telah dimurnikan kemudian dikarakterisasi untuk menentukan kondisi optimum enzim. hasil karakterisasi menunjukkan bahwa protease pls 47 memiliki aktivitas optimum pada suhu 60°c, ph 8, dan salinitas 2 m. analisis dengan sds-page menunjukkan bahwa enzim ini memiliki berat molekul sekitar 109 kda. secara keseluruhan, hasil penelitian ini mengindikasikan bahwa protease dari bakteri termohalofilik pls 47 memiliki stabilitas tinggi dan mampu bekerja pada rentang suhu, ph, serta salinitas yang luas, sehingga berpotensi untuk dikembangkan dalam berbagai aplikasi industri. kata kunci: protease pls 47, pemurnian, karakterisasi dan aktivitas spesifik

Protease is a hydrolytic enzyme that plays an important role in the biotechnology industry. This study aimed to purify and characterize the protease enzyme produced by the thermo-halophilic bacterial isolate Pria Laot Sabang 47 (PLS 47). The purification process began with fractionation using ammonium sulfate, followed by ion exchange chromatography using DEAE-Sepharose fast flow resin. In the ammonium sulfate fractionation step, the fraction with a saturation range of 40–60% showed the highest specific activity of 61 U/mg. Furthermore, purification using the DEAE-Sepharose fast flow column yielded fraction 23 with the highest specific activity, reaching 492 U/mg. The purified fraction 23 was then characterized to determine the optimum conditions of the enzyme. The characterization results showed that PLS 47 protease had optimum activity at 60°C, pH 8, and 2 M salinity. SDS-PAGE analysis revealed that this enzyme had a molecular weight of approximately 108.95 kDa. Overall, the results of this study indicate that the protease from the thermo-halophilic bacterium PLS 47 has high stability and is capable of working over a wide range of temperatures, pH, and salinity, making it a promising candidate for development in various industrial applications. Keywords: PLS 47 protease, purification, characterization, and specific activity